PGR analizė: ŽPV diagnozė su polimerazės grandinine reakcija

Žmogaus papilomos virusas (ŽPV) – DNR, kuriame yra įvairių rūšių viruso, sukeliančio navikus kūne, veide, rankose ir kojose, burnos gleivinėje, kakle ir lytiniuose organuose. ŽPV grupės, turinčios didelę kancerogeninę riziką, sukelia lytinių organų epitelinę neoplaziją ir žymiai padidina gimdos kaklelio, makšties, vulvos, lytinių organų ir tiesiosios žarnos riziką.

Remiantis metų statistika, apie 250 000 moterų miršta nuo gimdos kaklelio vėžio. Displazija ir ankstyva onkologijos stadija neturi įtakos jūsų sveikatai.

Polimerazės grandininė reakcija (PGR) lemia DNR sužadinimą mėginyje. Kartu naudojant citologinę atranką ir ŽPV analizę PCV, 99% padidėja ikivėžinio ir gimdos kaklelio vėžio aptikimo tikimybė. Gimdos kaklelio vėžiu sergantiems pacientams papilomos virusas, turintis aukštą onkogeniškumo laipsnį, buvo nustatytas 92% atvejų. Atlikus lemiamą vaidmenį kuriant šią patologiją, atsirado ankstyva ŽPV infekcijos diagnozė.

Bendroji informacija apie metodą

Polimerazės grandininė reakcija: kas tai? PGR yra molekulinės biologijos metodas, kurį galima naudoti norint nustatyti minimalų konkretaus DNR fragmento kiekį daugkartinio kopijavimo biologinėje medžiagoje. Pasirodo, to pakanka mokymuisi.

Šį metodą 1983 m. Išrado amerikiečių mokslininkė Carrie Mullis, vėliau gavusi Nobelio premiją. PGR dažnai naudojama įvairiems tikslams:

  • Virusinių ir bakterinių infekcijų (įskaitant ŽPV) diagnozė;
  • Kriminologija (nusikaltimo vietos medžiagos palyginimas su įtartinais modeliais);
  • Tėvystės nustatymas, asmens tapatybės nustatymas;
  • Moksliniai tyrimai genetikos, biologijos, farmacijos, medicinos srityse.

Pagrindiniai metodo pranašumai:

  • labai informatyvus;
  • nedidelis kiekis tiriamosios medžiagos.

PGR gali būti naudojama bet kokia biologinė medžiaga: kraujas, šlapimas, sėklos skystis, pleuros skystis, gleivinės.

Diagnozuojant žmogaus papilomos virusą moterims, įbrėžimus daro gimdos kaklelis, o vyrams – šlaplė.

Analizei atlikti reikalingas specialus instrumentas – stiprintuvas. Ten dedamas biomedžiagos pavyzdys. Tada šiluma kaitinama, po to atšaldoma ir pridedamas specifinis komponentas, susijęs su tiksliai apibrėžta viruso DNR dalimi (jei jos yra medžiagoje). Šis fragmentas nukopijuotas.

Tada ciklas grandinėje pakartojamas keletą kartų. Po kelių valandų DNR kiekis žymiai padidėja ir jo pakanka tolimesniam darbui. Bendra tyrimo trukmė yra 1–2 dienos.

Kada jums reikia šios analizės?

PGR tyrimo rekomendacijos yra šios:

  • Gimdos kaklelio vėžio rizikos grupės nustatymo atrankos programa, skirta moterims nuo 25 metų ar 3 metų po lytinio akto (patvirtinta nacionaliniu mastu JAV ir Europoje);
  • Moterų, kurioms buvo atlikta citologinė patikra prieš 3 metus, atranka;
  • Neoplazija, nustatyta citologinio patikrinimo metu;
  • abejotina citologinė danga;
  • Kontroliuoti praėjus šešiems mėnesiams po sunkios neoplazijos gydymo;
  • anksčiau nustatyti teigiami PGR rezultatai ŽPV didelės rizikos onkologijoje (optimalūs per metus);
  • Lytinių organų navikų diferencinė diagnozė (naudojama moterims ir vyrams);
  • stebint moteris, kurios jau sirgo gimdos kaklelio vėžiu;
  • ŽPV infekcijos diagnozė prieš nėštumą.

Pasirengimas apklausai

Norint gauti patikimus rezultatus, reikia apsvarstyti rekomendacijas, kaip paruošti papilomos virusą.

  1. PGR metodo ŽPV analizė atliekama praėjus mažiau nei mėnesiui po gydymo antibiotikais (per burną ar injekcijomis) nutraukimo ir praėjus 2 savaitėms po vietinio gydymo (tepalai, makšties žvakutės).
  2. Moterims analizė atliekama ne anksčiau kaip po 5 dienų po menstruacijų, geriausia per pirmąją ciklo pusę.
  3. Atlikus kolposkopiją ir ultragarsą su makšties zondu, analizė leidžiama po dviejų dienų.
  4. Dvi dienos prieš apklausą dušas ir seksas neįtraukiami.
  5. Higienos procedūros draudžiamos dienos metu ir ryte.
  6. Vyrai ne šlapinasi 2 valandas prieš tyrimą, nes paėmus karbamidą gaunami klaidingai teigiami rezultatai.

Biomaterialverfahren

Analizės rezultatas priklauso nuo medžiagos priėmimo kokybės. Susilpnėjus sterilumui, jei į biologines medžiagas patenka pašalinių medžiagų arba jei epitelio ląstelių nėra pakankamai tyrimui, rodikliai yra nepatikimi.

Moterims gimdos kaklelis pirmiausia gydomas steriliu fiziologiniu tirpalu. Įbrėžimas atliekamas specialiu šepečiu ar zondu. Įkiškite zondą apie 1 cm į gimdos kaklelio kanalą ir atsargiai pasukite apie 3 sekundes, išskyrus atvejus, kai liečiamasi su makšties sienelėmis. Nuimkite zondą iš paruošto terpės vamzdelio 10-15 sekundžių.

Procedūra vyrams yra analogiška. Varpos galvutę ir šlaplės angą nuvalykite fiziologiniu tirpalu, įdėkite zondą 3–4 cm į šlaplę, pasukite, išmeskite ir įdėkite į vidurinį vamzdelį. Medžiagą galima laikyti iki dviejų dienų kambario temperatūroje.

CME rodiklis (kontrolinė medžiaga) analizės pavidalu rodo, ar tyrimo medžiaga buvo surinkta siekiant nustatyti, ar mėginyje buvo pakankamai epitelio ląstelių. Mažiausia leistina KVM vienetų vertė – 4. Jei indikatorius nesiekia 4, analizė negali būti laikoma patikima ir turėtų būti pakartota.

Technikų tipai

PGR tyrime buvo naudojami keturių tipų papilomos viruso nustatymo metodai.

kokybės metodas

Tai yra ŽPV-VRC (didelės kancerogeninės rizikos) identifikavimas nenustačius patogeno tipo. Jis naudojamas kaip atranka kartu su kitais tyrimo metodais. Tai tik nurodo užsikrėtimo vienu ar daugiau ŽPV tipą. Yra analizių su skirtingais genotipais (nuo 14 iki 21).

  • „Aptikta“ – mėginyje yra vienos ar kelių viruso rūšių DNR.
  • „Neaptikta“ – trūksta ŽPV DNR mėginio.

genotipas

Naudodamiesi šia technika, galite nustatyti ŽPV VKR tipą. Tai svarbu prognozei, nes 16 ir 18 ŽPV tipai sukelia daugiau neoplazijos ir epitelio karcinomos nei kiti, o tai pablogina prognozę. Norint juos identifikuoti, reikalinga kolposkopija. Užsikrėtus kitomis rūšimis, jie pirmiausia kaulinami pagal citologiją.

Genotipas naudojamas, kai reikia diferencijuoti viruso atsparumą pakartotinei infekcijai. Jei praėjus vieneriems metams po teigiamos analizės nustatomi tie patys viruso metai, tai reiškia, kad jis lieka organizme. Jei buvo nustatyta kita rūšis, tai reiškia, kad įvyko kita infekcija.

Dažnai atsitinka, kad vyras ir žmona atpažįsta skirtingus virusų genotipus, o tai gali sukelti ginčus ir įtarimus dėl neištikimybės. Tačiau ši būklė yra susijusi su skirtingais organizmo išsiskyrimo iš viruso lygiais.

  • Atsakymas į bet kokio tipo virusą yra „atrastas“ arba „nepastebėtas“.

Kombinuoti būdai

Kokybinis ŽPV VKR nustatymas pagal 16 tipo genotipą.

  • „Neatpažintas“ – trūksta šių virusų tipų DNR;
  • “Aptikta, įskaitant 16 tipo ŽPV” – 16 tipas ir dar vienas ar daugiau kitų;
  • „Atrastas 16 tipo ŽPV“ – visų šių virusų, tik 16 tipo;

Kiekybinis nustatymas be genotipo nustatymo

Tai lemia vėžio virusų skaičių bandymo medžiagoje. Jis naudojamas nustatant infekcijos sunkumą, prognozę, parenkant optimalų gydymo režimą ir įvertinant rezultatą. Atlikta tik 16 ir 18 ŽPV tipų kiekybinė analizė.

Rezultatų įvertinimas (ŽPV 100 000 ląstelių):

  • mažiau nei 3 – nereikšminga viruso koncentracija;
  • 3-5 – kliniškai svarbus patogeno kiekis, galima neoplazija ar jų vystymosi rizika;
  • daugiau nei 5 – padidėjęs viruso kiekis, didelė epitelio neoplazijos ir gimdos kaklelio vėžio tikimybė.

Nėštumas tyrimas

Prieš nėštumą reikia pasidaryti ŽPV apžvalgą, nes latentinė infekcijos eiga vėliau gali tapti kliniškai dėl hormoninių pokyčių. Gydymo galimybės nėštumo metu yra labai ribotos.

Gimdymo metu yra infekcijos rizika. 6 ir 11 tipų ŽPV gali sukelti papilomos viruso išsivystymą naujagimyje.

Todėl ankstyva PGR analizė sutaupo daug problemų. Jei aptinkama infekcija, ją reikia gydyti iš anksto: spenelio pašalinimas ir antivirusinis gydymas.

Kur reikia išnagrinėti

PGR yra sudėtinga analizė, reikalaujanti brangios įrangos, reagentų ir apmokytų darbuotojų. Todėl tai galima atlikti tik specializuotose komercinėse laboratorijose (INVITRO, HELIX), kur reikalingos įgyvendinimo sąlygos. Įvairių PGR modifikacijų kaina svyruoja nuo 900 iki 2,5 tūkstančių rublių.

Be to, 300–400 rublių reikia norint surinkti biomedžiagas analizei. Kai kurie, norintys sutaupyti, vidurinį vamzdelį atsineša į komercinę laboratoriją, o tyrimų medžiagą – į gimdymo kliniką. Tokiu atveju laboratorija neatsako už nepatikimus rezultatus dėl galimo atšaukimo procedūros pažeidimo.

Valdymo taktika, priklausomai nuo apklausos rezultatų

90% atvejų organizmas kovoja su virusu nuo pusantrų iki dvejų metų (natūralus išsiskyrimas), didėjant amžiui, mažėja galimybė savarankiškai apsivalyti. 15% žmonių, kuriems atlikta teigiama PGR analizė, per 2 metus išsivysto gimdos kaklelio neoplazija.

  1. PGR yra neigiamas, citologija yra neigiamas – nereikia jokios specialios kontrolės. Rekomenduojami kasmetiniai vizitai pas ginekologą ir citologiniai tepinėliai.
  2. PGR yra teigiamas, citologinis rezultatas yra normalus – apsilankykite pas gydytoją per pusmetį, pakartokite citologiją ir ŽPV analizę.
  3. PGR yra neigiama atlikus citologijos rezultatus – pirmuosius epitelio displazijos simptomus – stebint, pakartotinė citologija po šešių mėnesių.
  4. Teigiamas PGR kartu su netipiškomis dangos ląstelėmis yra kolposkopija.

PGR yra labai tikslus ir jautrus metodas. Neteisingi analizės rezultatai beveik visada yra susiję su įvesties trukdžiais.

WRC apžvalga yra labai svarbi bendrai žmonių papilomos viruso infekcijos diagnozei, ankstyvos stadijos displazijos ir gimdos kaklelio vėžio nustatymui bei didelės rizikos grupių onkologijoje nustatymui.

ŽPV PGR analizė – kas tai yra ir kaip ji atliekama?

Bendroji informacija

Analizė grindžiama paciento DNR ištyrimu, siekiant nustatyti, ar jame nėra pašalinių elementų. Kiekviena DNR yra suformuota remiantis keturiais nukleotidais, kurie randami tam tikroje seka. Kai virusas patenka į kūną, toje grandinėje seka keičiasi, leidžiant greitai sekti net mažų pašalinių dalelių aktyvumą. PGR diagnostikos metodas atliekamas naudojant viruso daleles, kurios sukelia greitą ląstelių dalijimąsi.

Tokia diagnozė gali stebėti ŽPV aktyvumą ne tik latentinės fazės metu, bet ir inkubaciniu laikotarpiu, kai papilomos virusas neturėjo laiko pranešti. PGR sako:

  • ŽPV buvimas;
  • Padermės, kuriomis pacientas yra užkrėstas;
  • viruso kiekis organizme.

Dauguma žmonių yra užsikrėtę papilomos virusu, tačiau stiprus imunitetas slopina pasireiškimą ir neleidžia daugintis. Dėl šios priežasties ŽPV kokybės metodo įrodymas ne visada pateisinamas. Neracionalu, jei virusas yra organizme, tačiau jo įtaka yra minimali ir nekenkia asmeniui. Tačiau kokybinė analizė parodys teigiamą rezultatą, kuris pacientams gali sukelti painiavą.

Todėl labiausiai paplitusi diagnozė yra kiekybinis metodas, leidžiantis stebėti viruso kiekį organizme ir išsiaiškinti, kokia pavojinga jo veikla. Be to, svarbu nustatyti ŽPV padermę. Jie klasifikuojami pagal onkogeniškumo laipsnį: vieni yra visiškai saugūs ir gali sukelti tik kosmetines problemas, kiti gali sukelti vėžį.

Kiekviena situacija reikalauja individualaus požiūrio. Todėl prieš atliekant analizę patartina pasitarti su gydytoju. Jis jums pasakys, kurie metodai ir atmainos geriausiai tikrinami atsižvelgiant į paciento būklę.

Nurodymai analizei

ŽPV infekcija įmanoma tik tiesiogiai susisiekus su užkrėstu asmeniu. Virusas patenka į kraują ir pradeda daugintis viršutiniuose odos sluoksniuose, sukeldamas jam būdingus simptomus – papilomų ir karpos atsiradimą. ŽPV platinamas šiais būdais:

  • esant neapsaugotam seksui;
  • gimus vaikui nuo užkrėstos motinos;
  • Kontaktas su butu per įprastus daiktus, asmeninius daiktus, drabužius ir tt;
  • glaudžiai susilietus su paciento oda.

Daugumai žmonių, turinčių regėjimo ligos simptomus, diagnozuotas ŽPV. Tačiau jei jie nepasireiškia, viruso nebuvimas nėra garantuojamas. Jis taip pat gali būti kraujyje ir vystytis besimptomis. Tai visų pirma taikoma labai onkogeninių virusų tipams: 16 ir 18 vėžio kamienams. Paprastai šio tipo diagnozė nustatoma siunčiant specialistus: ginekologus ir urologus.

Metodo pranašumai

PGR yra laikomas vienu iš svarbiausių diagnostikos metodų ir vis dar yra populiariausias tarp gydytojų. Jis naudojamas ne tik ŽPV nustatyti, bet ir aptikti kitas lytiškai plintančias ligas, hepatitą, slaptas infekcijas ir kt. PGR diagnostika, palyginti su kitais ligos nustatymo metodais, turi keletą pranašumų. Tai apima:

  1. Aukštas specifiškumas. Tyrimas greičiausiai padės atskirti svetimos DNR pėdsakus nuo žmogaus DNR surinktoje medžiagoje.
  2. Didelė talpa. PGR yra automatizuotas procesas, padedantis diagnozuoti bandymo dieną. Ši tyrimų būsena suteikia pacientui galimybę per ilgą laiką prižiūrėti rezultatą ir per kelias dienas gauti rezultatą.
  3. Gebėjimas vienu metu atlikti kelis testus. Mėginys gali būti naudojamas diagnozuoti kelias ligas. Pvz., Kartu galite nustatyti chlamidiją ir gonorėją. Tačiau toks procesas neturi įtakos rezultato patikimumui.
  4. Didelis jautrumas. Tyrimas taip pat gali nustatyti viruso aktyvumą inkubacijos metu, kai jo koncentracija yra labai maža. Tai padės užkirsti kelią patologinio proceso vystymuisi ir pradėti ankstyvą gydymą.

Metodo silpnumas

Tačiau PGR diagnostikoje yra keletas neigiamų aspektų. Svarbiausia klaidingo teigiamo rezultato tikimybė. Tai atsitinka, kai gydymas jau atliekamas, infekcija įveikiama, tačiau negyvos ląstelės vis tiek lieka audinyje. Ląstelių atnaujinimas užtrunka.

Jei analizė trunka ilgiau nei 2–3 mėnesius, PGR gali parodyti teigiamą rezultatą, nes negyvos ląstelės jau laikomos gyvomis ląstelėmis. Tarp jų esantis metodas neišsiskiria, juo siekiama nustatyti viruso DNR, kuri taip pat yra jau negyvose ląstelėse. Visa tai lemia klaidingai teigiamą rezultatą. Šios situacijos galima išvengti, jei atliksite testą per gydytojo nustatytą laiką.

Taip pat yra klaidingo neigiamo rezultato pavojus. Tokiu atveju pacientas niekaip negali įtakoti diagnozės kokybės, nes neteisinga neigiama analizė yra laboratorinė klaida. Tai gali nutikti, jei:

  • surinkta medžiaga buvo neteisingai gabenama ir sandėliuojama;
  • Sterilumas yra susilpnėjęs ir į mikro pavyzdžius patenka kiti mikroorganizmai.
  • Reagentai nebuvo naudojami.

Norint atmesti klaidingą neigiamą rezultatą, reikėtų pasirinkti sertifikuotą laboratoriją, kurioje dirba kvalifikuoti darbuotojai.

Technikų tipai

PGR diagnostikai buvo sukurti keturi diagnostikos metodai. Kiekvienas iš jų turi savo elgesio ypatybes ir yra pavadintas pagal paciento būklę. Jei norite pasirinkti geriausią būdą, turėtumėte pasikonsultuoti su gydytoju.

kokybės metodas

Šis metodas naudojamas patvirtinti arba paneigti viruso buvimą organizme. Pagrindinis jo trūkumas yra nesugebėjimas nustatyti ŽPV kamieno (tik 14–21 tipo). Kokybės metodas dažniausiai naudojamas kartu su kitais virusinės papilomos nustatymo metodais. Balas perduodamas dviem balais: „pripažintas“ arba „nepripažintas“. Tai reiškia, kad metodas nurodo kito asmens DNR arba nurodo jo nebuvimą.

genotipas

Ši technika gali aptikti virusą organizme ir nustatyti jo tipą. Šis metodas naudojamas nustatyti, ar po gydymo viruso DNR vis dar yra, ar įvyko nauja infekcija. Su genotipo nustatymu galite įvertinti gydymo efektyvumą, nustatydami viruso tipą. To paties padermės, iš kurios buvo gydomas pacientas, gydymas buvo nesėkmingas. Jei tyrimas rodo kito tipo ŽPV, galbūt kalbate apie pasikartojančią infekciją. Rezultatas yra „rasta“ arba „nenustatyta“ formuluotė.

Kombinuotas metodas

Labai specializuotas diagnostikos metodas, pagrįstas kokybinių metodų deriniu ir 16 padermių nustatymu genotipo būdu. Rezultatas yra 3 atsakymai: „neaptikta“, „aptikta 16 padermių“, „16 įrodytas ŽPV tipas“. Šis metodas naudojamas apibendrinti didelės rizikos papilomos virusą, kuris moterims gali sukelti gimdos kaklelio vėžį.

Kiekybinis metodas

Šiuo metodu galite reguliuoti viruso koncentraciją organizme ir stebėti ŽPV vystymąsi. Tai laikoma labiausiai informatyvia, nes tai leidžia nustatyti atrankos proceso sunkumą. Nustatant viruso ląstelių skaičių 100 000 ištirtų. Jei derinys viršija 5, tai rodo didelę virusinių papilomų koncentraciją, o tai padidina vėžio ląstelių tikimybę. Jei ląstelių skaičius yra mažesnis nei 3, koncentracija nurodoma kaip nereikšminga.

Kaip atlikti analizę?

Nereikia specialaus diagnostinio mokymo. Pagrindinis reikalavimas yra tai, kad jūs ne šlapinatės valandas prieš operaciją. Rekomenduojama nebendrauti ir nevartoti alkoholio 2–3 dienas prieš apžiūrą. Tuo pačiu metu neturėtume pamiršti įdiegti intymios higienos palaikymo procedūras.

Kaip analizuoti vyrus

Lytinių organų galva yra gydomi fiziškai kartu su šlaplę. sprendimas. Gydytojas naudoja specialų šepetėlį, kuris įkišamas apie 4 cm. Tiriama medžiaga pašalinama sukant šviesą iš šlaplės. Gauta analizė laikoma mėgintuvėlyje ir siunčiama į laboratoriją tolimesniam tyrimui. Biomedžiagą galima laikyti nuo gavimo iki 2 dienų.

Kaip atlikti moterų analizę

Prieš tyrimą ant gimdos kaklelio užpilamas sterilus tirpalas. Tada šepetėliu nuimkite tamponą nuo gimdos kaklelio. Prietaisas yra maždaug colio gylio, tada gydytojas sukramto sienas sukdamas judesį. Biomedžiaga yra vamzdyje, kuris trunka apie 15 sekundžių. Ten gydytojas nuvalo jį ant sienų, tada pašalina. Tada vamzdelio turinys siunčiamas diagnozei nustatyti.

Biomedžiagų ėminių ėmimas

Tinkamas medžiagos rinkimas yra raktas į sėkmingą diagnozę. Jei šio proceso metu sutrinka sterilumas ir į mėgintuvėlį patenka pašaliniai mikroorganizmai, galima aptikti „virusą“, kurio iš tikrųjų nėra. Be to, gali būti klaida dėl nedidelio ląstelių skaičiaus, pašalinto analizei.

PGR analizės paaiškinimas

Priklausomai nuo diagnostikos metodo, pacientas mato skirtingus kontrolės rezultatus. Stulpelis „neatpažintas“ reiškia, kad viruso nėra kūne arba jo kiekis yra toks mažas, kad jo neįmanoma aptikti. Rezultatas “atviras” rodo patologinio proceso buvimą.

Jei pacientas naudoja kiekybinį metodą, dekoduojama taip:

  • Lg 5 ir daugiau – didelė viruso koncentracija;
  • Lg 3-5 – viruso lygis yra svarbus, bet ne kritinis.
  • Lg mažiau nei 3 – nedaug viruso ląstelių.

Bet kokiu atveju gydytojui turi rūpėti tikslus dekodavimas, nes tai suteiks diagnozę. Be to, tikslinga pakartoti procesą po tam tikro laiko, kad būtų išvengta klaidingo neigiamo ar klaidingo teigiamo rezultato.

Parašykite komentarą